유전공학 - Transformation의 원리와 종류
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유전공학 - Transformation의 원리와 종류
유전공학 - Transformation의 원리와 종류
Transformation의 원리
E.coli는 linear 또는 circular DNA를 받아들일 수 있는데, 이러한 과정을 transformation이라 하며 다음과 같은 단계를 거쳐 이루어진다. E.coli cell이 DNA를 uptake 할 수 있는 상태(competent)로 만들어 주기위해 E.coli cell을 Ca과 같은 multivalent ion의 존재 하에 0℃에서 incubation한다. 이때, cation은 E.coli cell membrane에 존재하는 lipid의 negatively ch-arged phosphate와 complex를 이룰 것으로 추정된다 낮은 온도는 cell membrane을 응고시켜 ch-arged phosphate의 분포를 안정화하여 cation에 의하여 효과(效果)적으로 shield되게 하여준다. 이때 37℃~42℃로 heat shock을 가하면 E.coli membrane내외의 thermal imbalance가 생겨 DNA가 세포 안으로 빨려 들어가게 된다 이외에 electroporation에 의한 transformation으로 electric ch-arge를 E.coli cell에 순간적으로 가하여 이때 생긴 pore를 통해 DNA를 세포 안으로 넣는 방법이 있다 Host cell로 들어간 DNA는 ampicillin내성 유전자(Beta lactamase를 cording하는 유전자)가 포함된 plasmid를 사용하여 ampicillin이 포함된 배지에서 선별해서 확인한다.
Transformation의 종류
가) 전기 충격법(Electroporation)
이 방법은 전기충격을 극히 짧은 시간동안 원형질체에 가하여 세포에 구멍을 뚫어 외래 DNA를 세포내로 넣는 것인데 장치(Electroporator)의 종류에 따라 약간의 차이는 있으나 원리는 같으며 샘플의 종류 및 장치의 종류에 따라 경험적으로 전압 및 시간들을 조절 사용하면 된다 전기충격에 의한 유전자도입은 원래 Electric field media…(To be continued )
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